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Projektübersicht |
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Versuchsreihe zu Exorbitranteneinschlag V31/10/00:
Exorbitrant V31/10/00
Zwischenlagerung des Exorbitranten V31/10/00, Präinkubation
Laborleiterin Dr. Clarissa da Costa entnimmt den Exorbitranten V31/10/00 aus der 80°C-Kühltruhe.
(Kühlraum)
Präinkubation: Bebrütung (bei 37°C, 250 rpm) über Nacht im Kulturenschrank.
(Zellkulturlabor)
PCR-Labor: DNA-Präperation mit konventioneller und real-time Polymerase Kettenreaktion
Semisterile Probenentnahme für DNA-Präparation in Lysepuffer
Supervisor assistiert Probenverdau mittels Proteinase K (20 mg/ml) in Lysepuffer (0,5%SDS. 1%Nonidet P40, 0,2 M NaC1, 10 pM DTT)
(PCR Labor-1)
Laborleiterin Dr. Clarissa da Costa unter Supervision von Michi Matthes, Funktionär der ESOTRONIK
Phenol-Chloroform-Extraktionsvorbereitung mit anschließender 2 x Ethanoi-Fällung der DNA, dann Aufnahme der DNA in 10 mM Tris-HCLEinsatz von 1 pg DNA / PCR-tube.
(PCR-Labor-2)
S2-Labor Zucht von Bakterien, sowie Zellkulturenexperimente
Herstellung von LB.Medium mit verschiedenen Antibiotika Zusätzen (10 mg/ml Vancomycin, 100 mg/mi Ampicillin, 1 Opg/mi Chloramphenicol)
(S2-Labor-1)
Bakterienzucht in verschiedenen Nährmedien.
(S2-Labor-2)
Aliquotieren der neuen Bakterienstämme für Transformationsexperimente.
(S2-Labor-3)
Elektroporation der Bakterien mit pcDNA3-TLR9-GFP-Vektor (20OmV)
(S2-Labor-4)
Durchführung der ersten Zellkulturenexperimente auf dentritischen Zellen mit transformierten Bakterien durch Fr. Dr. Sandra Beer (Leiterin des Zellkulturlabors)
(S2-Labor-5)
FPLC-Labor Untersuchung von organischen Materealien durch Proteinanreicherung
Trypsinbehandlung des Objekts zur Proteinaufreinigung.
Probenvorbereitung für AnionenaustauschChromatographie in FPLC
(FPLC-Labor-1)
Plattenmikroskopische Kontrolle des Enzymverdaus.
(FPLC-Labor-2)
S2-Labor Zucht von Bakterien, sowie Zellkulturenexperimente
Ausplattieren der transformierten und genuinen Bakterien auf LB-Amp-Platten.
(S2-Labor-6)
Klon 22/pCMV-Vektor nach Selektion
(S2-Labor-7)
Präliminäre Ergebnisse:
DNA:
Eukaryontische und prokaryonische DNA amplifizierbar
Es gibt DNA, die humaner bakterieller DNA ähnelt. Genaue Sequenzen werden zur Zeit entschlüsselt. (ESOTRONIK-Sequencing-Lab, San Diego, CA)
Bakterien:
Erfolgreiche Kultivierung von speziesunbekannten Bakterien
Anzüchtbar unter variablen Bedingungen (Antibiotika-Zusatz zu Medien, Zuchttemperatur) transformierbar mit herkömmlichen kommerziellen Vektoren; exprimieren keine bekannten Resistenzgene humanpathogen im Zellkulturenexperimentalsetting.)
Proteine:
Nachweis von Proteinen auf der Exorbitrantenoberfläche
Aufgrund des Laufverhaltens im Gradienten-Gel und der vorherrschenden Größe könnte es sich um ubiquitäre Heat-Shock-Proteine der Größe 60 kDa handeln. Herkunft ungeklärt. Eventuell durch Deorbitrierung induziert.
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